Присоединяйся к нам
Платформа, где покупают и продают студенческие работы
Главная Каталог работ Дипломы Детектирование цитоплазматической мембраноассоциированной ДНК электрофоретическим методом

Детектирование цитоплазматической мембраноассоциированной ДНК электрофоретическим методом

Дипломы, Естественнонаучные, Химия, БГПУ им. М. Танка
32 страницы
37 источников
2017 год
39.99BYN
390.00BYN
Купить
Поделиться в социальных сетях
Содержание
Часть работы
Список литературы

РЕФЕРАТ 2
СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Характеристика ДНК, входящей в состав цитоплазматических ДНК-мембранных комплексов 6
1.2 Теоретические основы горизонтального электрофореза 7
1.3 Электрофорез в агарозном геле 9
1.3. Миграция ДНК в агарозном геле 10
1.4 Подготовка и проведение электрофореза 15
1.4.1 Приготовление агарозного геля 15
1.4.2 Подготовка и нанесение проб 16
1.4.3. Окраска и фиксация 18
1.4.4 Буферные растворы 19
1.4.5 Буфер для проб 20
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 21
2.1 Получение препаратов геномной и цитоплазматической ДНК млекопитающих 21
2.2 Определение количества белка в препаратах ДНК 21
2.3 Определение молекулярных характеристик препаратов ДНК спектрофотометрическим методом 21
2.4 Электрофорез ДНК в агарозном геле 21
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 23
3.1 Влияние условий гельэлектофореза на электрофоретическую подвижность фрагментов ДНК маркера Lambda DNA/HindIII 23
3.2 Определение структуры и молекулярной массы цпДНК 26
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 29
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 30

Выводы:
1. Использование анионного детергента NP-40 позволило выделить цитоплазматическую мембраноассоциированную ДНК из клеток глиомы крыс.
2. Спектрофотометрическим методом и методом Лоури показано, что препараты цитоплазматической ДНК содержали до 20% белка и до 5% РНК.
3. Установлено, что оптимальными условиями гель-электрофореза для определения молекулярной массы цитоплазматической ДНК являются: гель 1,2%, напряжение 70V, температура 10 оС, время 4 часа. ДНК маркер - λ/Hind III; количество маркера, наносимого в лунку – 0,3 мкг.
4. Методом гель-электрофореза установлено, что цитоплазматическая ДНК имеет линейную двуспиральную структуру, её молекулярная масса составляет 22 – 25 тыс. п.о.

1. Bustamante C. Towards a molecular description of pulsed-field gel electrophoresis / C. Bustamante, S. Gurrieri, S.B. Smith // Trends biotechnol. – 1993. – Vol. 11, N 1. – P. 23 – 30.
2. Slater G.W. Recent developments in DNA electrophoretic separations / G.W. Slater, T.B. Kist, H. Ren, G. Drouin // Electrophoresis. – 1998. – Vol. 19. – N 10. – P 1525-1541.
3. Lerner, R. A. Membrane-associated DNA in the cytoplasm of diploid human lymphocytes / R. A. Lerner, W. Meinke, D. A. Goldstein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1971. – Vol.68, №6. – P. 1212.
4. Meinke, W. Physical properties of cytoplasmic membrane-associated DNA / R. A. Lerner, W. Meinke, D. A. Goldstein, M. R. Hall, D. E. Kohne // J. Mol. Biol. – 1973. – Vol. 78, №1. – P. 43-56.
5. Meinke, W. Reassociation and dissociation of cytoplasmic membrane-associated DNA / W. Meinke, D. A. Goldstein // J. Mol. Biol. – 1974. – Vol. 86, №4. – P. 757-773.
6. Tonutti, E. Cell lines that express membrane-associated DNA for anti-DNA antibody detection / E. Tonutti, N, Blasone, D. Visentini, M. Poletto, D. Villalta, R. Tozzoli, N. Bizzaro // Clin. Chem. Lab. Med. – 2008. – Vol. 46, №4. – P. 458-462.
7. Bennett, R. M. Anti DNA expressed on the surface of monocytes and B lymphocytes / R. M. Bennett, J. Davis, M. Merritt // J. Rheumatol. – 1986. – Vol. 13. – P. 679–685.
8. Bennett , R. M. DNA receptor dysfunction in systemic lupus erythematosus and kindred disorders. Induction by anti DNA antibodies, antihistone antibodies and antireceptor antibodies / R. M. Bennett , B. L. Kotzin, M. J. Merritt // J. Exp. Med. – 1987. – Vol. 166. – P. 850–863.
9. Servais, G. Eviddence of autoantibodies to cell membrane associated DNA (cultured lymphocytes): a nue cpesific marcer for rapid identification of systemic lupus erythematosus / G. Servais, M. P. Guillaume, N. Dumarey, J. Duchateau // Ann. Rheum. Dis. – 1998. – Vol. 57. – P. 606-613.
10. Slater G.W. Theory of DNA electrophoresis: a look at some current challenges / G.W. Slater, C. Desruisseaux, S.J. Hubert, J.F. Mercier, J. Labrie, J. Boileau, F. Tessier, M.P. Pepin // Electrophoresis. – 2000. – Vol. 21. – N 18. – P 3873 – 3887.
11. Molinari M. Analyzing cotranslational protein folding and disulfide formation by diagonal sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis / M. Molinari, A. Helenius // Methods Enzymol. – 2002. – Vol. 348. – P 35-42.
12. Slater G.W. Theory of DNA electrophoresis / G.W. Slater, S. Guillouzic, M.G. Gauthier, J.F. Mercier, M. Kenward, L.C. McCormick, F. Tessier // Electrophoresis. – 2002. – Vol. 23 (22-23). – P 3791 – 816.
13. Zeman S.M. Simultaneous measurement of binding constants and unwinding angles by gel electrophoresis / S.M. Zeman, D.M. Crothers // Methods Enzymol. – Vol. 340. – P 51 – 68.
14. Slater G.W. The theory of DNA separation by capillary electrophoresis. / G.W. Slater, M. Kenward, L.C. McCormick, M.G. Gauthier // Curr Opin Biotechnol. – 2003. – Vol. 14. – N 1. – P 58 – 64.
15. Rodbard D. Unified theory for gel electropho¬resis and gel filtration / D. Rodbard, A. Chrambach // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1970. – Vol. 65. – N 4. – P 970 – 977.
16. Галь Э., Медьеши Г., Верецкеи Л., Электрофорез в разделении биологических макромолекул // Москва, Мир. – 1982. – 446 с.
17. Ackers G.K. Restricted diffusion of macromolecules through agar-gel membranes / G.K. Ackers , R.L. Steere // Biochim. Biophys. Acta. – 1962. – Vol. 59. – N 1. – P 137 – 149.
18. Остерман Л.А., Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование // Москва, Наука. – 1981. – 286 с.
19. Щукин Е.Д., Перцов А.В., Амелина Е.А., Коллоидная химия // Москва, ВШ. – 2006. – С. 162 – 194.
20. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии // Ленинград, Химия. – 1974. – С. 192 – 236.
21. Johnson P.H. Electrophoresis of DNA in agarose gels. II. Effects of loading mass and electroendosmosis on electrophoretic mobilities / P.H. Johnson, M.J. Miller, L.I. Grossman // Anal. Biochem. – 1980. – Vol. 102. – N 1. – P 159 – 162.
22. Schwartz D.C. Conformational Dynamics of Individual DNA Molecules During Gel Electrophoresis / D.C. Schwartz, M. Koval // Nature. – 1989. – Vol. 338. – N 6215. – P 520 – 522.
23. Gurrieri S. Trapping of megabase DNA molecules during agarose gel electrophoresis / S. Gurrieri, S. B. Smith, C. Bustamante // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. – 1999. – Vol. 96. – N 2. – P 453 – 458.
24. Gurrieri S. Purification and staining of intact yeast DNA chromosomes and real-time abservation of their migration during gel electrophoresis / S. Gurrieri, C. Bustamante // Biochem. J. – 1997. – Vol. 326. – N 1. – P 131 – 138.
25. Маниатис Т., Э. Фрич, Дж. Сэмбрук, Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М.: Мир. – 1984. – 478 с.
26. Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Third Edition) / J. Sambrook, D. Russell // CSHL Press. – 2001. – Р 2344.
27. Overbeek J. T. G. The interpretation of electrophoretic mobilities / J. T. G. Overbeek, P. H. Wiersema // in Electrophoresis. – 1967. – Vol. 2. – Р 1 – 41.
28. Peacock A.C. Molecular Weight Estimation and Separation of Ribonucleic Acid by Electrophoresis in Agarose- Acrylamide Composite Gels / A.C. Peacock, C.W. Dingman // Biochemistry. – 1968. – Vol. 7. – N 2. – P 668 – 674.
29. Dahlberg A.E. Electrophoretic Characterization of Bacterial Polyribosomes in Agarose-Acrylamide Composite Gels / A.E. Dahlberg, C.W. Dingman, A.C Peackok. // J. Mo1. Bio. l. – 1969. – Vol. 41. – N 1. - P 139 – 147.
30. Dahlberg A.E. Some Effects of Antibiotics on Bacterial Polyribosomes as Studied by Gel Electrophoresis / A.E. Dahlberg, Lund E., Kjeldgaard N.O. // J. Mol. Bio. l. – 1973 - Vol.78. – N 4. – P 627 – 636.
31. Overbeek, J. T. G., and Lijklema, J. (1959) in Electrophoresis, Vol. 1, Edit. Bier, M., Academic, New York, p. 1 – 33.
32. Chrambach A. Polyacrylamide gel electrophoresis / A. Chrambach, D. Rodbard // Science. – 1971– Vol.172. – N 982. – P 440 – 451.
33. Yuan C. Comprehensive Interpretation of Gel Electrophoresis Data / C. Yuan, E. Rhoades, D.M. Heuer, S. Saha, X.W. Lou, L.A. Archer // Analytical Chemistry. – 2006. – Vol. 78. – N 17. – P 6179 – 6186.
34. Panyim S. High resolution acrylamide gel electrophoresis of histones / S. Panyim, R. Chalkley // Arch Biochem Biophys. – 1969. – Vol. 130. – N 1. – P 337 – 346.
35. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. – 1970. – Vol. 227. – N 5259. – P 680 – 685.
36. Gromova I. Protein Detection in Gels by Silver Staining: A Procedure Compatible with Mass-Spectrometry / I. Gromova, J.E. Celis // in Cell Biology: A Laboratory Handbook. – 2006. – Vol. 4
37. McLellan T. Electrophoresis buffers for polyacrylamide gels at various pH / T. McLellan // Anal Biochem. – 1982. – Vol. 126. – N 1. – P 94 – 99.

Похожие работы
Выделение и очистка цитоплазматических ДНК-мембранных комплексов из клеток млекопитающих
Дипломы, Естественнонаучные, Химия, БГПУ им. М. Танка
40.0 руб.
390.0 руб.
Не нашeл, что искал?
Закажи оригинальную работу сейчас
Узнать стоимость
Оставить отзыв
Имя
Город
Рейтинг
Отзыв

Задать вопрос
Задать вопрос